測定食物中氨基酸含量一般采用氨基酸分析儀，柱后衍生測定。但氨基酸分析儀價格昂貴，分析時間長，且只能用于分析氨基酸，限制了氨基酸分析技術(shù)的廣泛應(yīng)用。七十年代以來，柱前衍生高效液相色譜法開始應(yīng)用于氨基酸的測定。液相色譜通用性強，檢測靈敏度高,可用于多種物質(zhì)的分析。

濟南魯瑞科學儀器有限公司所采用柱前衍生紫外檢測的方法對幾種食物中的16種氨基酸進行了測定。

方法

1、試劑

濃鹽酸（優(yōu)級純），（分析純），混合氨基酸標準液，含17種蛋白水解氨基酸，天冬氨酸、、、、、、、、、、、擷氨酸、蛋氨酸、賴氨酸、異、、苯，除濃度為1.25mmol/L外，其余16種氨基酸濃度各為2.5mmol/L流動相A,磷酸鹽緩沖液用1：10雙蒸水稀釋，pH4.95。亦可自行配制，流動相B：乙睛，流動相C：雙蒸水,硼酸鹽緩沖液衍生試劑6一氨基喹琳基一N一羥基琥珀酞亞氨基甲酸酯，用時加入1mL乙睛,混勻于55℃烘箱加熱10min至溶解。

2、儀器
高效液相色譜儀

紫外檢測器

真空泵

渦旋混合器

3、色譜條件色譜柱

色譜柱：高效C18色譜柱

柱溫：37℃

檢測波長：248nm
進樣量：10uL

梯度洗脫條件

4、實驗方法

4.1衍生反應(yīng)

衍生試劑（AQC）與氨基酸迅速反應(yīng)生成在248nm有紫外吸收的高穩(wěn)定性的脲和羥基琥珀酰亞胺（NHS），過量的試劑可在慢反應(yīng)中*水解，過程如下

4.2氨基酸衍生步驟
用微量注射器移取10uL稀釋的氨基酸標準液或樣品水解液放人6 (50mm樣品
管底部加人70uL硼酸鹽緩沖液,渦旋混合10s)，邊渦旋混合邊加入20uL衍生試劑溶液，用封口膜密封樣品管,置于55℃烘箱中加熱10min，從烘箱中取出樣品管冷卻至室溫,供分析用。此衍生樣品于4℃保存兩周。

4.3樣品水解
精密稱取適量樣品約0.5-1.0g于水解管中,加入6mol/L鹽酸10-15ml，加入少量新蒸餾的，抽真空，充高純氮氣，重復(fù)3次。迅速將已充好氮氣的水解管擰緊蓋子，放入110℃烘箱中水解22h。水解完畢，將水解液過濾，定容。取適量，于55℃減壓干燥至干，再用適量二次蒸餾水復(fù)溶，備用。
工作曲線制作將氨基酸標準液配制成濃度分100,200,400,600,800,1000umol/L的溶液，每一標準液取10uL依上法衍生后進行測定。

4.4結(jié)果與討論
回歸方程根據(jù)工作曲線，以峰面積（A）與濃度（C）進行回歸分析，回歸方程結(jié)果見表2。各氨基酸的檢測限為0.54umol/L

結(jié)果：

優(yōu)化了衍生試劑用量、衍生時間、緩沖鹽濃度以及pH值和柱溫等影響因素，最終在40 min內(nèi)實現(xiàn)了18種氨基酸的分離。

結(jié)論：該方法操作簡便、靈敏度高、準確度和精密度好，可用于注射液中氨基酸的含量測定。